|
HEPES是一种非离子两性缓冲液,其在pH 7.2 - 7.4
范围内具有较好的缓冲能力。其大优点是在开放式培养或细胞观察时能维持较恒定的PH值.在这种培养条件下,细胞培养瓶的盖子应拧紧,以防止培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中.大多数培养液中含有酚红作为pH指示剂,酸性培养液呈橙黄色,碱性培养液呈深红色.HEPES有些昂贵,在高浓度时对一些细胞可能有毒.
原则上,HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制.实际操作中并非如此简单.
溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长也是很重要的。
HEPES使用方法有两种：
(1)HEPES可按所需的浓度直接加入到配制的培养液中,再过滤除菌.每1000ml培养液中加入2.38克HEPES,待溶后用lN NaOH
调pH至7.2,滤过除菌后使用.此时HEPES的使用浓度为10 mmol/L.
(2)亦可配成 100 x 贮存液（l mol/L），使用前取
99ml培养液加入 lml贮存液，终应用浓度仍为10mmol/L。l mol/L（100 x）HEPES贮存液配制方法:取23.8g
HEPES溶于90ml双蒸水中,用lN
NaOH调pH至7.5一8.0,然后用水定容至100ml,过滤除菌,分装小瓶（2ml/瓶）,4℃或-20℃保存.
本产品采用细胞培养级的HEPES原料，为已经配好的1M溶液，无菌过滤。可以直接使用。 |
